L’allergène est absorbé à la surface de puits en polystyrène.
Le sérum est mis en contact dans les puits; si des IgE spécifiques sont présentes dans le prélèvement, elles se lient à l’allergène.
Un mélange d’anticorps monoclonaux conjugués au récepteur Fcε et à de la biotine est ajouté dans le puit; ce cocktail monoclonal se lie aux différents épitopes sur la portion Fcε de la molécule d’IgE.
Un conjugué avidine-alcaline-phosphatase est ajouté dans le puit; chaque molécule enzymatique se lie à la biotine sur le complexe IgE monoclonal, ce qui améliore la sensibilité et la spécificité.
Pour détecter la liaison enzymatique, du phosphate de p-nitrophenyl est rajouté dans le puit; lorsque l’enzyme est fixée dans le puit, le substrat à base de pnpp se colore en jaune. L’intensité de la coloration reflète la quantité d’IgE spécifique d’allergène dans le sérum testé.
